Поскольку необходимость дальнейшего изыскания антибиотиков очевидна, то следует рассмотреть стратегию такого поиска. В таблице 2.2 приведена большая часть антибиотиков, применяемых в медицине и сельском хозяйстве. Из таблицы видно, что большинство из них вырабатывается при ферментации стрептомицетов. Неоднократно показано [9, 10], что антибиотикообразующая способность данной группы микроорганизмов равна приблизительно 50 %.
3.2) [250]. Интерес
Несмотря на обилие предложенных бактерицидных комбинаций, существуют следующие общие проблемы:
1) как установить различия между аддитивным и синергидный действием (см. гл. 7, 23 и 24);
2) как оценить комбинированное воздействие (комбинации двух, трех или более факторов, см. гл. 9), которое может вызвать сопутствующую задачу, связанную с необходимостью подтвердить эффективность этого воздействия каким-либо методом, основанным на восстановлении жизнеспособности бактериальной культуры (см.
Триметоприм преимущественно активен против Streptococcus faecalis, тогда как сульфонамид более активен против патогенных нейссерий, в то же время ни один из препаратов не обладает достаточной активностью против Pseudomonas. Другими словами, их совместный спектр антибактериальной активности охватывает очень широкий ряд микроорганизмов, включая обычные пиогенные грамположитель-ные кокки, Haemophilias influenzae и большое число знтеробакте-рий.
Одним из этих веществ является циклосерин, который довольно широко использовался при лечении инфекций мочевого тракта и туберкулеза, хотя теперь он вытесняется другими препаратами. Интерес к циклосерину как к синергидному препарату связан с тем, что он влияет на синтез клеточной стенки бактерий, ингибируя две важные реакции на самых ранних стадиях формирования структурных единиц клеточной стенки. Под действием циклосерина происходит последовательная блокировка следующих друг за другом стадий .
е. комбинация проявляет свое бактерицидное действие в такой степени, которую можно считать достаточной в борьбе с эндокардитами; и в-четвертых, что даже при двухходовом антагонизме присутствие пенициллина исключительно эффективно предотвращает появление мутантов, резистентных к фузидату.
Легко представить себе несколько путей использования синергид-ных комбинаций в терапии. Наиболее вероятным из них является одноврменное применение активных, но чувствительных к ферментам р-лактамных антибиотиков вместе с ингибитором р-лактамаз широкого спектра действия.
Для облегчения сравнения результатов, полученных этим методом на штаммах бактерий с разной чувствительностью к ТМП и сульфонамидам,. величины МИК для каждого препарата при разном соотношении выражали в виде десятичной доли величины МИК соответствующего препарата при его индивидуальном применении. Эта доля была названа «фракциональная ингибирующая концентрация» (ФИК) [33]. В том случае, если сумма ФИК для каждого препарата, т.
По мнению Баркера и др. [8], существование таких мутантов является скорее закономерностью, чем исключением, если иметь в виду, что их идентификацию проводят редко. Однако высокая эффективность комбинации ТМП+СМЗ и редкие рецидивы заболеваний указывают на то, что в данном случае резистентность не имеет существенного значения в клинике. Объясняется эта эффективность либо низким содержанием тимидина в тканях и других частях организма, недостаточным для того, чтобы поддержать рост бактерий, либо неспособностью оставшихся аномальных форм бактерий к размножению в организме хозяина.
lactis. Этот метод разделения позднее был дополнен стандартным методом, основанным на инкубации с низиназой, экстрагированной из В. cereus [10]. Другой метод обнаружения низина, который представляется более простым и используется для сортировки, состоит в определении кислотности в молочной культуре устойчивых и чувствительных к низину штаммов Str. lactis после добавления тестируемого продукта. В качестве стандартного метода для дифференциации низина, пенициллина, стрептомицина и эритромицина используется метод биоавтографии с тест-культурой 5.
Ростстимулирующая активность
Первые попытки использовать низин для стимуляции роста животных оказались неудачными [8, 13]. Более того, осталось незамеченным сильное увеличение массы тела лабораторных животных, которым скармливали низин в токсикологических опытах {29, 137].
Были проведены эксперименты по кормлению: в четырех опытах (в Польше) использовали более 100 телят и в двух (в Чехословакии) — 100 поросят.
Затем фильтр переносят на поверхность соответствующей селективной среды и инкубируют до появления колоний. Исключительная гибкость данного метода стала сразу же очевидной, так как мембранный фильтр с фиксированными на нем микроорганизмами можно легко переносить из одной среды в другую и тем самым использовать для восстановления бактерий несколько элективных сред. С помощью мембранного фильтра было изучено восстановление микрофлоры молока [24], кроме того, метод был приспособлен для исследования образцов пастеризованного молока [13].
[24]. Оказалось, что, несмотря на пастеризацию молока, стафилококки могут обнаруживаться в сыре. Было установлено, что 22 % сыров, изготовленных из пастеризованного молока, содержат коагулазо-положительные стафилококки бычьего фаготипа: [6]. Лион и Меллман [11], Зоттола и Ежецки (25) еще до этого-сообщали о возможной стафилококковой контаминации после пастеризации молока, предназначенного для изготовления сыра.
Молочную кислоту применяли в концентрациях 10, 20, 30 в 40 %. Влияние ее на рН сырных блоков показано в таблице 10.7.
Даже 40%-пая молочная кислота не доводила рН голубого-сыра стилтон до рН необработанного белого сыра стилтон. Величина рН во всех блоках не претерпевала существенных изменений в течение семи дней инкубации. Реакция стафилококков была, одинаковой в обоих сырах, несмотря на различие в рН (рис.
Анализ факторов, влияющих на количество и размножение Staph, aureus в сыре, показывает, что критическим значением рН, предотвращающим рост бактерий, является рН 5,2; но поскольку микроорганизмы выживают и при более низких величинах рН, а
в большей части периода созревания сыра рН выше 5,2 то в этих диапазонах на стафилококки влияют и другие факторы. В дальнейшем следует изучить конкретную роль казеинолитических штаммов и возможное значение D- и L-форм молочной кислоты.
. ТБСП (триптозный бульон с соевым пептоном Оксоид СМ 129-4-+ 15 г/л агара) использовали в качестве неселективной среды, для бактерий, а ДДА (дрожжевой экстракт — 0,5 % масса/объем, декстроза — 2 % масса/объем, агар-—1,5 % масса/объем) — для дрожжей. В работе использовали следующие селективные среды:
1) Н. beyerlnckii — окситетрациклин-полимиксиновый агар (ОПА) [17]. 100 мкг/мл окситетрациклина и 100 мкг/мл поли-миксина вносили в ОПА : ДДА после стерилизации;
2) Staph, aureus — а) фенилэтаноловый агар (ФЭА) [78] (ФЭА : ТБСП + 0,35 % масса/объем 2-фенилэтанола); б) агар Фогель—Джонсона (ФД) (ФД:Мерк);
3) Aeromonas — кристалл-виолет агар (КВА) [78] (КВА: : ТБСП + 2 мкг/мл кристалл-виолета добавляли после стерилизации);
4) Е.
Нипагин-М. При подсчете клеток Aeromonas на использованных питательных средах различий не установлено, что говорит об отсутствии сублетательно поврежденных клеток (рис. 12.2). В случае Staph, aureus (рис. 12.3) получены некоторые данные о повреждении клеток на среде ФД (но не на ФЭА). Поврежденные клетки образовывали колонии на ФД после оживления в течение 80 мин на ТБСП. Клетки Е. coli получали незначительное, но заметное сублетальное повреждение после инкубации с нипагином.
Более заметные повреждения обнаружены у Staph, aureus,
что может быть совместным результатом инкубации в течение ночи и действия антибиотика (рис. 12.6). Клетки Staph, aureus, обработанные нипагином-М, оказались более поврежденными и размножались лучше на ФЭА, чем на ФД-агаре. Имеются данные, что после начального восстановления на ТБСП число подсчитанных клеток уменьшается как на селективной, так и на неселективной среде.
Преимущество этой формы в том, что она направлена как против клинической, так и субклинической стафилококковой инфекции, которые могут не реагировать на лечение в период лактации. Эта лекарственная форма подходит для терапии стрептококковых инфекций и инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями.
В настоящее время известно несколько лекарственных форм препаратов для лечения животных, среди которых есть капсулы, таблетки и пудра, которую можно добавлять в корма и воду.
Природа этих систем такова, что при присущей им высокой скорости воспроизводства скота в современных условиях, когда популяция животных бывает подвержена воздействию различных заболеваний инфекционной природы, возникает необходимость тщательного надзора и борьбы с болезнями, особенно если они грозят прибылям, для получения которых эти системы интенсивного животноводства и были предназначены в первую очередь.
В результате этого ветеринарные врачи ведут борьбу с различными инфекционными заболеваниями, распространенными в окружающей среде, среди которых следует отметить коли-маститы, инфекционный аборт, копытную гниль, комплекс из контагиозной пневмонии и заболеваний верхних дыхательных путей, а также энтериты, вызванные вирусами, бактериями группы кишечной палочки и салмонеллами.
Ветеринарная наука и наши коллеги одинаково заинтересованы в сохранении здоровья и продуктивности домашних животных и хорошо сознают роль факторов внешней среды в возникновении
заболеваний, которые могут представлять основную экономическую проблему для интенсивного животноводства.
Фармацевты в первую очередь ответственны за форму используемых ветеринарных препаратов, но обнадеживающие результаты in vitro часто неправильно характеризуют чувствительность препаратов против специфических возбудителей. Клиницистам не требуется большого воображения, чтобы объяснить, почему при хроническом фиброзном поражении вымени стафилококками или при острой инфекции С. pyogenes применение клоксациллина и пенициллина соответственно неэффективно, тогда как in vitro их эффективность показана.
В указанный период отмечались значительно чаще обычного случаи острого клинического проявления маститов у коров после отела, причем большинство из них приходилось на стада с хорошим содержанием и низким числом подсчитанных клеток живых микроорганизмов. В наших исследованиях практиковались автоматическая терапия в сухостойный период, промывание сосков и разбрызгивание препаратов. Фойл и Жиллет [10] установили, что в большинстве случаев за клиническое проявление мастита в стадах, в которых среднее число живых микроорганизмов в течение двух лет составляло 300ХЮ3 клеток/мл, были ответственны Strep, uberis и Е.
Поскольку коровы постоянно контактируют с бактериями из внешней среды, то субклинический уровень инфекции обычно отмечается в 50—70 % случаев от общего числа стад. Субклинически зараженные животные могут проявить клинические симптомы маститов, и если не проводить обработку антибиотиками, то это приводит к повышению уровня инфекции в стаде. Имеющаяся инфекция в конце периода лактации может сохраниться в зараженном вымени, и уровень субклинического мастита после отела может оказаться значительно выше, чем во время предыдущей лактации.
Подсчету клеток как индикатору уровня зараженности молока стали придавать большее внимание лишь недавно. На многих фермах в профилактических схемах предусмотрен подсчет лейкоцитов в сборном молоке, и дело, очевидно, идет к тому, что подобный прием станет использоваться для оценки качества молока вообще. В некоторых странах качество молока уже оценивается по числу лейкоцитов, при большом числе которых поставщики облагаются штрафом.
Рост двух штаммов Staph, aureus подавлялся на 50% при концентрации белка 2—5 мкг/мл, тогда как для Strep, agalactiae эта величина составила 11,5 мкг/мл.
:.Указанная антимикробная активность исчезала в присутствии анионных белков, выделенных из того же самого соскового канала. По аналогии с этим если катионную фракцию предварительно проинкубировать 15 мин при 37 °С и рН 7,0 вместе с такими анионными полимерами, как ДНК или гепарин, то образовавшиеся комплексы утрачи вали биологическую активность (табл.
Кератин соскового канала не обладает антимикробной активностью in vitro. В опытах in vitro, хотя и показана определенная потеря антимикробной активности (10,0—11,5) у гистона F11A из тимуса телят при экстракции в присутствии молока или казеина, однако это не отражает условий в функционирующем сосковом канале, где белки с низшим значением активности (7,0—9,0) синтезируются непрерывно [36]. Это однозначно подтверждает мнение, что стафилококки, локализованные в сосковых каналах, обычно защищены этими основными белками.
На первых этапах применения кислот для консервации зерна существовало мнение, что некоторые виды плесеней могут сохранять свою жизнедеятельность при предельно низких уровнях этих кислот и способны вырабатывать резистентность к применяемой кислоте. В начале исследований по консервированию в лабораторных опытах кислоты использовали с разной дозировкой. На основании полученных результатов было сделано заключение, что при низком уровне добавленных кислот наблюдается различие в толерантности к кислотам у разных видов плесеней.
При 1-часовой обработке оптимальная активация отмечена при концентрации 2,0— 4,0 М (рис. 22.1 и 22.2). При более высоких концентрациях или большей длительности обработки отмечалось ингибирование прорастания (рис. 22.3).
Необходимо отметить, что хотя чувствительность отдельных споровых суспензий является весьма постоянной и воспроизводимой, все же между суспензиями различных культур наблюдалась значительная вариабельность.
ной кислоты при различной концентрации, после чего химические вещества из образцов отделяли центрифугированием или разводили питательной средой до неэффективной концентрации. Использовали три среды: 1) пептон-декстрозный агар (рН 5,2), содержащий краситель бенгальский розовый (33 мг/'л) и стрептомицин (30 мг/л) [2]; 2) картофельный агар с декстрозой (рН 5,6), содержащий стрептомицин (50 мг/л); 3) обычный агар (2 %), доведенный разбавленной НС1 до рН 4,0.
Проблема силы антимикробного действия не является простой, и в ней следует различать три существенных элемента:
1) эффект (Е) действия препарата, например количество или процент убитых или лишенных способности к размножению микробных клеток;
2) количество (Q) препарата. Если рассматриваемое действие можно отнести к равным объемам, то вместо количества следует употреблять концентрацию, например минимальную эффективную концентрацию (МЭК), определяемую методом серийных разведений;
3) время действия препарата (t).
Другими словами, нам необходимо установить, как и в какой степени использование таких понятий, как парциальный эффект, парциальное количество или парциальная величина времени, позволяет дать приемлемое определение аддитивности.
Однако до рассмотрения этого мы хотим ввести следующий постулат: термины «аддитивность» и «заменяемость» являются идентичными. Это, очевидно, не вызывает сомнений, но позже мы вернемся к точному обоснованию этого постулата.
Значение передачи лекарственной устойчивости in vivo
Механизмы приобретения резистентности к антибиотику бактериями одинаковы как в организме людей, так и животных. Поэтому, учитывая большую вероятность перекрестного заражения резистентными штаммами между людьми и животными, очень важным представляется изучение и контроль тех условий, при которых возникает и распространяется резистентность.
.R-плазмидная передача является наиболее важным механизмом возникновения резистентности к антибиотику в бактериальной популяции.
Каждый изолят подвергали О-серо типированию и определяли резистентность хотя бы к одному анти биотику. У обоих телят до введения антибиотиков резистентные штаммы Е. coli составляли значительную часть от всей микрофлоры кишечника.
В настоящее время это наблюдается у большинства телят. У телят, не получавших препараты, число этих бактерий со временем1 уменьшается и лишь иногда отмечаются случайные пики преобладания резистентных штаммов.
Исходя из предположения, что животные являются источником резистентных штаммов Е. coli для человека, на рисунке 26.3 указаны возможные пути передачи этих микроорганизмов среди животных, а также между ними и человеком. Резистентные штаммы Е. coli попадают в организм человека следующими наиболее вероятными путями: 1) при прямом контакте; 2) при обработке сырого мяса; 3) при потреблении недостаточно проваренного мяса или мясных продуктов или при потреблении других продуктов без проварки, после того как они могли загрязниться от сырого мяса на кухне.
Большинство энтеропатогенных штаммов Е. coli обладает множественной резистентностью, и борьба с ними может быть строго ограничена применением полимиксина вместо неомицина и кана-мицина. Антибиотикотерапия при этих инфекциях не является обязательной или необходимой, однако при неонатальных инфекциях, которые могут заканчиваться смертельным исходом, например как при вспышке в Мидлсбро, ограниченность в выборе антибиотиков может сказаться очень сильно [3].
coli с передаваемой резистентностью к антибиотикам (R+), поэтому важное значение имеет, как и в какой степени указанная резистентность к антибиотикам может передаваться другим энтеробактериям, особенно патогенным. Попытки воспроизвести экспериментально передачу резистентности в пищеварительном тракте людей и лабораторных животных в основном оказались неудачными, хотя обычная микрофлора поддается модификации на животных гнотобионтах или отбирается при селективном применении антибиотиков.
Применение в ветеринарии стрептомицина и сульфонамидов также может быть одной из причин значительного увеличения резистентности к указанным антибиотикам, проявившейся лишь в изучаемый период, поскольку эти два антибиотика никогда не использовались в качестве кормовой добавки. К возникшей ситуации по резистентности могут быть причастны оба антибиотика, так как из 144 резистентных к стрептомицину штаммов, выделенных от разных свиней за 1972— 1975 гг.
Поскольку необходимость дальнейшего изыскания антибиотиков очевидна, то следует рассмотреть стратегию такого поиска. В таблице 2.2 приведена большая часть антибиотиков, применяемых в медицине и сельском хозяйстве. Из таблицы видно, что большинство из них вырабатывается при ферментации стрептомицетов. Неоднократно показано [9, 10], что антибиотикообразующая способность данной группы микроорганизмов равна приблизительно 50 %.
3.2) [250]. Интерес
Несмотря на обилие предложенных бактерицидных комбинаций, существуют следующие общие проблемы:
1) как установить различия между аддитивным и синергидный действием (см. гл. 7, 23 и 24);
2) как оценить комбинированное воздействие (комбинации двух, трех или более факторов, см. гл. 9), которое может вызвать сопутствующую задачу, связанную с необходимостью подтвердить эффективность этого воздействия каким-либо методом, основанным на восстановлении жизнеспособности бактериальной культуры (см.
Триметоприм преимущественно активен против Streptococcus faecalis, тогда как сульфонамид более активен против патогенных нейссерий, в то же время ни один из препаратов не обладает достаточной активностью против Pseudomonas. Другими словами, их совместный спектр антибактериальной активности охватывает очень широкий ряд микроорганизмов, включая обычные пиогенные грамположитель-ные кокки, Haemophilias influenzae и большое число знтеробакте-рий.
Одним из этих веществ является циклосерин, который довольно широко использовался при лечении инфекций мочевого тракта и туберкулеза, хотя теперь он вытесняется другими препаратами. Интерес к циклосерину как к синергидному препарату связан с тем, что он влияет на синтез клеточной стенки бактерий, ингибируя две важные реакции на самых ранних стадиях формирования структурных единиц клеточной стенки. Под действием циклосерина происходит последовательная блокировка следующих друг за другом стадий .
е. комбинация проявляет свое бактерицидное действие в такой степени, которую можно считать достаточной в борьбе с эндокардитами; и в-четвертых, что даже при двухходовом антагонизме присутствие пенициллина исключительно эффективно предотвращает появление мутантов, резистентных к фузидату.
Легко представить себе несколько путей использования синергид-ных комбинаций в терапии. Наиболее вероятным из них является одноврменное применение активных, но чувствительных к ферментам р-лактамных антибиотиков вместе с ингибитором р-лактамаз широкого спектра действия.
Для облегчения сравнения результатов, полученных этим методом на штаммах бактерий с разной чувствительностью к ТМП и сульфонамидам,. величины МИК для каждого препарата при разном соотношении выражали в виде десятичной доли величины МИК соответствующего препарата при его индивидуальном применении. Эта доля была названа «фракциональная ингибирующая концентрация» (ФИК) [33]. В том случае, если сумма ФИК для каждого препарата, т.
По мнению Баркера и др. [8], существование таких мутантов является скорее закономерностью, чем исключением, если иметь в виду, что их идентификацию проводят редко. Однако высокая эффективность комбинации ТМП+СМЗ и редкие рецидивы заболеваний указывают на то, что в данном случае резистентность не имеет существенного значения в клинике. Объясняется эта эффективность либо низким содержанием тимидина в тканях и других частях организма, недостаточным для того, чтобы поддержать рост бактерий, либо неспособностью оставшихся аномальных форм бактерий к размножению в организме хозяина.
lactis. Этот метод разделения позднее был дополнен стандартным методом, основанным на инкубации с низиназой, экстрагированной из В. cereus [10]. Другой метод обнаружения низина, который представляется более простым и используется для сортировки, состоит в определении кислотности в молочной культуре устойчивых и чувствительных к низину штаммов Str. lactis после добавления тестируемого продукта. В качестве стандартного метода для дифференциации низина, пенициллина, стрептомицина и эритромицина используется метод биоавтографии с тест-культурой 5.
Ростстимулирующая активность
Первые попытки использовать низин для стимуляции роста животных оказались неудачными [8, 13]. Более того, осталось незамеченным сильное увеличение массы тела лабораторных животных, которым скармливали низин в токсикологических опытах {29, 137].
Были проведены эксперименты по кормлению: в четырех опытах (в Польше) использовали более 100 телят и в двух (в Чехословакии) — 100 поросят.
Затем фильтр переносят на поверхность соответствующей селективной среды и инкубируют до появления колоний. Исключительная гибкость данного метода стала сразу же очевидной, так как мембранный фильтр с фиксированными на нем микроорганизмами можно легко переносить из одной среды в другую и тем самым использовать для восстановления бактерий несколько элективных сред. С помощью мембранного фильтра было изучено восстановление микрофлоры молока [24], кроме того, метод был приспособлен для исследования образцов пастеризованного молока [13].
[24]. Оказалось, что, несмотря на пастеризацию молока, стафилококки могут обнаруживаться в сыре. Было установлено, что 22 % сыров, изготовленных из пастеризованного молока, содержат коагулазо-положительные стафилококки бычьего фаготипа: [6]. Лион и Меллман [11], Зоттола и Ежецки (25) еще до этого-сообщали о возможной стафилококковой контаминации после пастеризации молока, предназначенного для изготовления сыра.
Молочную кислоту применяли в концентрациях 10, 20, 30 в 40 %. Влияние ее на рН сырных блоков показано в таблице 10.7.
Даже 40%-пая молочная кислота не доводила рН голубого-сыра стилтон до рН необработанного белого сыра стилтон. Величина рН во всех блоках не претерпевала существенных изменений в течение семи дней инкубации. Реакция стафилококков была, одинаковой в обоих сырах, несмотря на различие в рН (рис.
Анализ факторов, влияющих на количество и размножение Staph, aureus в сыре, показывает, что критическим значением рН, предотвращающим рост бактерий, является рН 5,2; но поскольку микроорганизмы выживают и при более низких величинах рН, а
в большей части периода созревания сыра рН выше 5,2 то в этих диапазонах на стафилококки влияют и другие факторы. В дальнейшем следует изучить конкретную роль казеинолитических штаммов и возможное значение D- и L-форм молочной кислоты.
. ТБСП (триптозный бульон с соевым пептоном Оксоид СМ 129-4-+ 15 г/л агара) использовали в качестве неселективной среды, для бактерий, а ДДА (дрожжевой экстракт — 0,5 % масса/объем, декстроза — 2 % масса/объем, агар-—1,5 % масса/объем) — для дрожжей. В работе использовали следующие селективные среды:
1) Н. beyerlnckii — окситетрациклин-полимиксиновый агар (ОПА) [17]. 100 мкг/мл окситетрациклина и 100 мкг/мл поли-миксина вносили в ОПА : ДДА после стерилизации;
2) Staph, aureus — а) фенилэтаноловый агар (ФЭА) [78] (ФЭА : ТБСП + 0,35 % масса/объем 2-фенилэтанола); б) агар Фогель—Джонсона (ФД) (ФД:Мерк);
3) Aeromonas — кристалл-виолет агар (КВА) [78] (КВА: : ТБСП + 2 мкг/мл кристалл-виолета добавляли после стерилизации);
4) Е.
Нипагин-М. При подсчете клеток Aeromonas на использованных питательных средах различий не установлено, что говорит об отсутствии сублетательно поврежденных клеток (рис. 12.2). В случае Staph, aureus (рис. 12.3) получены некоторые данные о повреждении клеток на среде ФД (но не на ФЭА). Поврежденные клетки образовывали колонии на ФД после оживления в течение 80 мин на ТБСП. Клетки Е. coli получали незначительное, но заметное сублетальное повреждение после инкубации с нипагином.
Более заметные повреждения обнаружены у Staph, aureus,
что может быть совместным результатом инкубации в течение ночи и действия антибиотика (рис. 12.6). Клетки Staph, aureus, обработанные нипагином-М, оказались более поврежденными и размножались лучше на ФЭА, чем на ФД-агаре. Имеются данные, что после начального восстановления на ТБСП число подсчитанных клеток уменьшается как на селективной, так и на неселективной среде.
Преимущество этой формы в том, что она направлена как против клинической, так и субклинической стафилококковой инфекции, которые могут не реагировать на лечение в период лактации. Эта лекарственная форма подходит для терапии стрептококковых инфекций и инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями.
В настоящее время известно несколько лекарственных форм препаратов для лечения животных, среди которых есть капсулы, таблетки и пудра, которую можно добавлять в корма и воду.
Природа этих систем такова, что при присущей им высокой скорости воспроизводства скота в современных условиях, когда популяция животных бывает подвержена воздействию различных заболеваний инфекционной природы, возникает необходимость тщательного надзора и борьбы с болезнями, особенно если они грозят прибылям, для получения которых эти системы интенсивного животноводства и были предназначены в первую очередь.
В результате этого ветеринарные врачи ведут борьбу с различными инфекционными заболеваниями, распространенными в окружающей среде, среди которых следует отметить коли-маститы, инфекционный аборт, копытную гниль, комплекс из контагиозной пневмонии и заболеваний верхних дыхательных путей, а также энтериты, вызванные вирусами, бактериями группы кишечной палочки и салмонеллами.
Ветеринарная наука и наши коллеги одинаково заинтересованы в сохранении здоровья и продуктивности домашних животных и хорошо сознают роль факторов внешней среды в возникновении
заболеваний, которые могут представлять основную экономическую проблему для интенсивного животноводства.
Фармацевты в первую очередь ответственны за форму используемых ветеринарных препаратов, но обнадеживающие результаты in vitro часто неправильно характеризуют чувствительность препаратов против специфических возбудителей. Клиницистам не требуется большого воображения, чтобы объяснить, почему при хроническом фиброзном поражении вымени стафилококками или при острой инфекции С. pyogenes применение клоксациллина и пенициллина соответственно неэффективно, тогда как in vitro их эффективность показана.
В указанный период отмечались значительно чаще обычного случаи острого клинического проявления маститов у коров после отела, причем большинство из них приходилось на стада с хорошим содержанием и низким числом подсчитанных клеток живых микроорганизмов. В наших исследованиях практиковались автоматическая терапия в сухостойный период, промывание сосков и разбрызгивание препаратов. Фойл и Жиллет [10] установили, что в большинстве случаев за клиническое проявление мастита в стадах, в которых среднее число живых микроорганизмов в течение двух лет составляло 300ХЮ3 клеток/мл, были ответственны Strep, uberis и Е.
Поскольку коровы постоянно контактируют с бактериями из внешней среды, то субклинический уровень инфекции обычно отмечается в 50—70 % случаев от общего числа стад. Субклинически зараженные животные могут проявить клинические симптомы маститов, и если не проводить обработку антибиотиками, то это приводит к повышению уровня инфекции в стаде. Имеющаяся инфекция в конце периода лактации может сохраниться в зараженном вымени, и уровень субклинического мастита после отела может оказаться значительно выше, чем во время предыдущей лактации.
Подсчету клеток как индикатору уровня зараженности молока стали придавать большее внимание лишь недавно. На многих фермах в профилактических схемах предусмотрен подсчет лейкоцитов в сборном молоке, и дело, очевидно, идет к тому, что подобный прием станет использоваться для оценки качества молока вообще. В некоторых странах качество молока уже оценивается по числу лейкоцитов, при большом числе которых поставщики облагаются штрафом.
Рост двух штаммов Staph, aureus подавлялся на 50% при концентрации белка 2—5 мкг/мл, тогда как для Strep, agalactiae эта величина составила 11,5 мкг/мл.
:.Указанная антимикробная активность исчезала в присутствии анионных белков, выделенных из того же самого соскового канала. По аналогии с этим если катионную фракцию предварительно проинкубировать 15 мин при 37 °С и рН 7,0 вместе с такими анионными полимерами, как ДНК или гепарин, то образовавшиеся комплексы утрачи вали биологическую активность (табл.
Кератин соскового канала не обладает антимикробной активностью in vitro. В опытах in vitro, хотя и показана определенная потеря антимикробной активности (10,0—11,5) у гистона F11A из тимуса телят при экстракции в присутствии молока или казеина, однако это не отражает условий в функционирующем сосковом канале, где белки с низшим значением активности (7,0—9,0) синтезируются непрерывно [36]. Это однозначно подтверждает мнение, что стафилококки, локализованные в сосковых каналах, обычно защищены этими основными белками.
На первых этапах применения кислот для консервации зерна существовало мнение, что некоторые виды плесеней могут сохранять свою жизнедеятельность при предельно низких уровнях этих кислот и способны вырабатывать резистентность к применяемой кислоте. В начале исследований по консервированию в лабораторных опытах кислоты использовали с разной дозировкой. На основании полученных результатов было сделано заключение, что при низком уровне добавленных кислот наблюдается различие в толерантности к кислотам у разных видов плесеней.
При 1-часовой обработке оптимальная активация отмечена при концентрации 2,0— 4,0 М (рис. 22.1 и 22.2). При более высоких концентрациях или большей длительности обработки отмечалось ингибирование прорастания (рис. 22.3).
Необходимо отметить, что хотя чувствительность отдельных споровых суспензий является весьма постоянной и воспроизводимой, все же между суспензиями различных культур наблюдалась значительная вариабельность.
ной кислоты при различной концентрации, после чего химические вещества из образцов отделяли центрифугированием или разводили питательной средой до неэффективной концентрации. Использовали три среды: 1) пептон-декстрозный агар (рН 5,2), содержащий краситель бенгальский розовый (33 мг/'л) и стрептомицин (30 мг/л) [2]; 2) картофельный агар с декстрозой (рН 5,6), содержащий стрептомицин (50 мг/л); 3) обычный агар (2 %), доведенный разбавленной НС1 до рН 4,0.
Проблема силы антимикробного действия не является простой, и в ней следует различать три существенных элемента:
1) эффект (Е) действия препарата, например количество или процент убитых или лишенных способности к размножению микробных клеток;
2) количество (Q) препарата. Если рассматриваемое действие можно отнести к равным объемам, то вместо количества следует употреблять концентрацию, например минимальную эффективную концентрацию (МЭК), определяемую методом серийных разведений;
3) время действия препарата (t).
Другими словами, нам необходимо установить, как и в какой степени использование таких понятий, как парциальный эффект, парциальное количество или парциальная величина времени, позволяет дать приемлемое определение аддитивности.
Однако до рассмотрения этого мы хотим ввести следующий постулат: термины «аддитивность» и «заменяемость» являются идентичными. Это, очевидно, не вызывает сомнений, но позже мы вернемся к точному обоснованию этого постулата.
Значение передачи лекарственной устойчивости in vivo
Механизмы приобретения резистентности к антибиотику бактериями одинаковы как в организме людей, так и животных. Поэтому, учитывая большую вероятность перекрестного заражения резистентными штаммами между людьми и животными, очень важным представляется изучение и контроль тех условий, при которых возникает и распространяется резистентность.
.R-плазмидная передача является наиболее важным механизмом возникновения резистентности к антибиотику в бактериальной популяции.
Каждый изолят подвергали О-серо типированию и определяли резистентность хотя бы к одному анти биотику. У обоих телят до введения антибиотиков резистентные штаммы Е. coli составляли значительную часть от всей микрофлоры кишечника.
В настоящее время это наблюдается у большинства телят. У телят, не получавших препараты, число этих бактерий со временем1 уменьшается и лишь иногда отмечаются случайные пики преобладания резистентных штаммов.
Исходя из предположения, что животные являются источником резистентных штаммов Е. coli для человека, на рисунке 26.3 указаны возможные пути передачи этих микроорганизмов среди животных, а также между ними и человеком. Резистентные штаммы Е. coli попадают в организм человека следующими наиболее вероятными путями: 1) при прямом контакте; 2) при обработке сырого мяса; 3) при потреблении недостаточно проваренного мяса или мясных продуктов или при потреблении других продуктов без проварки, после того как они могли загрязниться от сырого мяса на кухне.
Большинство энтеропатогенных штаммов Е. coli обладает множественной резистентностью, и борьба с ними может быть строго ограничена применением полимиксина вместо неомицина и кана-мицина. Антибиотикотерапия при этих инфекциях не является обязательной или необходимой, однако при неонатальных инфекциях, которые могут заканчиваться смертельным исходом, например как при вспышке в Мидлсбро, ограниченность в выборе антибиотиков может сказаться очень сильно [3].
coli с передаваемой резистентностью к антибиотикам (R+), поэтому важное значение имеет, как и в какой степени указанная резистентность к антибиотикам может передаваться другим энтеробактериям, особенно патогенным. Попытки воспроизвести экспериментально передачу резистентности в пищеварительном тракте людей и лабораторных животных в основном оказались неудачными, хотя обычная микрофлора поддается модификации на животных гнотобионтах или отбирается при селективном применении антибиотиков.
Применение в ветеринарии стрептомицина и сульфонамидов также может быть одной из причин значительного увеличения резистентности к указанным антибиотикам, проявившейся лишь в изучаемый период, поскольку эти два антибиотика никогда не использовались в качестве кормовой добавки. К возникшей ситуации по резистентности могут быть причастны оба антибиотика, так как из 144 резистентных к стрептомицину штаммов, выделенных от разных свиней за 1972— 1975 гг.