д. Еще одним ограничением в применении антибиотиков в некоторых случаях явились их токсичность и побочное действие, например хлорамфеникол и новобиоцин.
Совершенно очевидно, что в данный момент нет однозначных данных об ожидаемом старении всех антибиотиков, чтобы можно было запланировать замену определенных соединений, как это было сделано несколько лет назад при изучении таких органических веществ, как кокцидиостатики (когда почти полностью удалось предопределить зависимость резистентности простейших от длительности применения препарата).
Довольно интенсивно изучены представители Micromonospora, и у этой группы нитевидных микробов обнаружено несколько сот антибиотиков [5]. В большинстве своем эти антибиотики по химическому строению близки метаболитам стрептомицетов, но не всегда идентичны, и эти различия имеют терапевтическое значение. Такие же интенсивные попытки сделаны в изучении Actinoplanes, хотя в сравнении с Micromonospora здесь достигнуты более скромные результаты и обнаружено лишь несколько антибиотиков [13].
Испытания препаратов необходимо проводить in vivo и in vitro, однако техника испытаний пока еще остается недостаточно совершенной, чтобы можно было обнаружить тонкие различия между исследуемыми препаратами. Первоначальная стоимость оценки этих соединений может колебаться в пределах от 200 долл. при очень поверхностном исследовании до 5000 долл. при подробном изучении.
Альтернативой программы получения полусинтетических антибиотиков, основанной на успехах органической химии, является работа по осуществлению биотрансформации по типу биоконверсии стероидов.
И, наконец, согласно последней концепции, при применении комбинации препаратов задерживается возникновение резистентности, что также указывает на важность проблемы комбинирования.
«К несчастью, возросшее применение комбинации лекарств вызвало появление R-факторов у бактерий. Эти эписомные плаз-миды способны обусловливать полную резистентность к ряду лекарств одновременно. Таким образом, при наличии R-факторов резистентность может проявляться даже к комбинации из четырех или пяти лекарств, что полностью исключает предполагаемый успех, от конкурентной терапии.
Синергизм, подобный описанному для карбеницил-лина и гентамицина, был установлен в лабораторных опытах in vivo и in vitro при применении различных комбинаций этих новейших пенициллинов с аминогликозидами [12, 15, 16, 41].
В таблице 7.3 приведены результаты действия ряда комбинаций пенициллина + аминогликозида на три штамма Ps. aeruginosa. Антибактериальную активность определяли методом микротитрования на агаровой пластинке, как это показано на рисунке 7,2.
Ампициллин и клокса-циллин оказались неэффективными при предотвращении гибели зараженных мышей, тогда как комбинация этих двух пенициллинов обладала заметным защитным действием.
Ингибирование активности 8-лактамазы проиллюстрировано на рисунке 7.6, на котором показана бактерицидная активность ампициллина и комбинации ампициллин+ клоксациллин против штамма Е. coli, вырабатывающего В-лактамазу. Ампициллин в концентрации 10 мкг/мл вызывал некоторое подавление роста в первые 3 ч, но к 6 ч концентрация его падала до 2 мкг/мл и число живых клеток было таким же, как и в контрольной культуре.
coli. Указанные дефекты, но выраженные более явно, наблюдались в твердом сычужном эммен-тальском сыре.
3. НП-закваска высокочувствительна к действию бактериофагов.
Эти результаты снизили интерес к использованию в качестве закваски низинпродуцирующих бактерий. Такие закваски применялись лишь в Голландии для получения сыров, предназначенных для переплавки.
В начале 60-х годов промышленное внедрение метода бактофу-гации только зарождалось.
Более существенным представляется различие в величине рН двух использованных сыров. Как видно из рисунка 10.15, различие между непроницаемой и проницаемой пленкой скорее обусловлено большей скоростью потери воды.
В то же время следует отметить, что уменьшение числа бактерий под водопроницаемой пленкой достигает больших размеров еще до появления различий в весе сыров. Несмотря на известный факт
повышенного токсинообразования стафилококками при возрастании в среде СОг, тем не менее снижение числа стафилококков под непроницаемой пленкой указывает на то, что это обстоятельство, не имеет практического значения для упаковки сыра [20].
По данным У. Смита и др. [3], применение в сухостойный период бензатин-клоксациллина, являющегося относительно нерапрепарат клоксациллина на быстро освобождающейся основе;---препарат клоксациллина на медленно освобождающейся (для сухостойных коров) основе.
створимой солью и проявляющего пролонгированное действие, позволяет добиться персистенции препарата и тем самым увеличить эффект его антибактериального действия против стафилококковой инфекции до 50—70 %.
В результате были опубликованы сообщение Шванновского комитета и комментарии доктора У. Смита относительно бактерий. В этих публикациях было указано на необходимость пересмотреть проблемы лечения животных и разработать такую систему лечения, которая свела бы до минимума риск постоянного существования резистентных штаммов.
Об экономическом значении болезней при разведении животных говорили Моррис и Эдлис для случая с маститами, а Говиер привел данные, согласно которым потери в свиноводстве из-за бактериальных или других инфекций для фермы в 1000 свиноматок составляют значительную величину.
coli, обычно бывает мукогеморрагическим и прогрессирующим.
При высокой дозировке антибиотики профилактируют дизентерию свиней, а эмтрил (диметридазол), введенный в рацион в дозе от 0,01 до 0,15 %, предотвращает появление клинических симптомов. 1
Бейли и др. [Г] провели обследование 17 датских свиноводческих ферм и определили типичные формы бактерий в организме погибших от пневмонии животных. В 25 % случаев обнаружены С, L и другие серотипы стрептококков: Haemophillus parahaemolyticus в 24,5 % случаев, Pasteurella в 11,4, С.
Так, Зив [52] интенсивно изучил фармакокинетику антибиотиков, предназначенных для терапии в сухостойный и лактационный периоды, и указал на более экономичные и быстрые способы оценки новых лекарственных форм по сравнению с имеющимися на сегодняшний день.
Интенсивное использование во всем мире препаратов (большая часть которых применяется наугад, автоматически и нерационально) вселяет надежду, что такое массовое применение интрацистер-нальной терапии в дальнейшем принесет какую-нибудь пользу.
Недавно Североирландским управлением по торговле молоком установлены более высокие штрафы, которые вынуждают поставщиков молока продавать молоко только без остатков антибиотиков. Однако мы должны еще пройти длинный путь, чтобы приблизиться к той ситуации, которая сложилась в Дании и Нидерландах, где в масштабе всей страны количество положительных анализов на остатки антибиотиков в молоке значительно ниже 1%, а определимый уровень соответствует 0,01 ИЕ/мл.
При дозе 24 мг/кг два теленка пали, однако эти телята во время первого введения комбинации препаратов уже были в тяжелом состоянии с необратимыми патологическими изменениями. Таким образом, в этом опыте также была подтверждена неэффективность одного триметоприма, хотя задержка смертности, как и в первом случае, была совершенно очевидной. При индивидуальном применении триметоприм и сульфонамиды обладают бактериостатическим действием in vitro, а в комбинации (наиболее часто) — бактерицидным.
Результат оказался аналогичным: диаметр соскового канала является наиболее важным фактором, от которого зависит резистентность к новой интрацистернальной инфекции [23].
В пользу защитного барьера соскового канала имеется много данных. Указанная зависимость подтверждена в опытах на 6 дойных козах, в сосковый канал которых вводили 6Х Ю-4 мл культуры Strep, agalactiae, содержащей от 1,5X102 до 1,5X104 комп-лементсвязывающих единиц культуры (КСЕ).
Антимикробным действием обладает также система лактопе-роксидаза (тиопиаиат) Н202, которая подавляет рост некоторых штаммов стрептококков, вырабатывающих молочную кислоту [24, 34]. Совсем недавно было установлено, что эта система подавляет рост Е. coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella thyphimu-riumnStaph. aureus [33]. Лактопероксидаза присутствует в молоке, однако уровень SCN- (тиоцианата) может изменяться и зависит от режима кормления.
Белки, выделяющиеся из лейкоцитов молока при воспалении, обладают антимикробной активностью и проявляют такие же антигенные и хроматографические свойства, как и катионные белки, выделенные из лейкоцитов молока [4]. Гольдштейн и др. [8] обнаружили освобождение белков из полиморфноядерных лейкоцитов в связи с последовательной активацией альтернативного пути комплемента. Известно, что такая активация может осуществляться эндотоксинами Е.
Однако ее можно выражать путем сравнения вызываемого препаратами эффекта при постоянных Q и t, либо путем сравнения концентраций, необходимых для получения одинакового Е за одинаковое t, либо путем сравнения времени действия при постоянных Е и Q.
Очевидно, что измерение потенциальной активности с учетом каждой из этих трех возможностей требует предварительного экспериментального определения каждой из переменных по отдельности.
С учетом высказанных замечаний ниже рассмотрены результаты некоторых исследований по распределению антибиотиков, в особенности полусинтетических пенициллинов, таких, как ампициллин, амоксициллин и клоксациллин, а также их значение для ветеринарного использования.
Метод диффузии в агаре идеально подходит для определения антибиотиков в жидкостях и тканях организма в широком диапазоне концентраций. При этом требуются сравнительно небольшие количества биологического материала.
Обработка образцов специфическим ферментом пенициллиназой служит простым и надежным тестом на присутствие пенициллинов.
В таблице 25.1 перечислены наиболее пригодные тест-микробы и указаны пределы их чувствительности к некоторым полусинтетическим пепициллинам. С их помощью можно проводить определение большинства полусинтетических пенициллинов в концентрациях до 0,01 мкг/мл или на 1 г ткани или жидкости тела при применении антибиотиков в ветеринарии.
До сих пор с переменным успехом предпринят ряд попыток показать ПРЛ у животных и человека. Передача in vivo продемонстрирована у животных, кишечная микрофлора которых была доведена до минимума или отсутствовала совсем. Это было достигнуто путем выращивания мышей в стерильных условиях [46, 81], использованием цыплят сразу же после их выхода из яйца [104], постановкой опытов на голодавших ягнятах, у которых микрофлора рубца была заменена бактериями группы кишечной палочки [100], или в результате применения антибиотиков [8, 9].
Таким образом, было определено количество колибактерии, резистентных по крайней мере к этим двум антибиотикам. В таблице 26.1 приведены средние данные, характеризующие каждый вид животных, а также человека.
В литературе уже сообщалось, что между видами животных имеются значительные различия по общему числу обнаруживаемых колибактерии (52, 89, 98). Особенно это характерно для взрослого крупного рогатого скота, у которого иногда колибактерии вообще невозможно установить, а если их и обнаруживают в течение многодневных наблюдений, то в очень небольшом количестве (43).
Ситуация в ветеринарии имеет аналогию и в медицине. Анти-биотикотерапия создает резистентную популяцию микроорганизмов в кишечнике человека. Особенно заметно это происходит в больницах, где антибиотики применяют широко. Контактное, перезаражение резистентными бактериями в больницах особую опасность представляет для больных хирургических отделений. К счастью, такое перезаражение резистентными бактериями редко происходит вне больниц, где живет основная масса людей.
выделенных от домашних животных. В частности, было установлено, что такие штаммы на Североамериканском континенте распространены значительно шире, поскольку там антибиотики использовали в большем объеме, чем в Европе, где они применялись в довольно ограниченном масштабе. В Северной Америке высокая степень резистентности характерна для салмонелл, изолированных от большинства видов домашних животных, тогда как.
д. Еще одним ограничением в применении антибиотиков в некоторых случаях явились их токсичность и побочное действие, например хлорамфеникол и новобиоцин.
Совершенно очевидно, что в данный момент нет однозначных данных об ожидаемом старении всех антибиотиков, чтобы можно было запланировать замену определенных соединений, как это было сделано несколько лет назад при изучении таких органических веществ, как кокцидиостатики (когда почти полностью удалось предопределить зависимость резистентности простейших от длительности применения препарата).
Довольно интенсивно изучены представители Micromonospora, и у этой группы нитевидных микробов обнаружено несколько сот антибиотиков [5]. В большинстве своем эти антибиотики по химическому строению близки метаболитам стрептомицетов, но не всегда идентичны, и эти различия имеют терапевтическое значение. Такие же интенсивные попытки сделаны в изучении Actinoplanes, хотя в сравнении с Micromonospora здесь достигнуты более скромные результаты и обнаружено лишь несколько антибиотиков [13].
Испытания препаратов необходимо проводить in vivo и in vitro, однако техника испытаний пока еще остается недостаточно совершенной, чтобы можно было обнаружить тонкие различия между исследуемыми препаратами. Первоначальная стоимость оценки этих соединений может колебаться в пределах от 200 долл. при очень поверхностном исследовании до 5000 долл. при подробном изучении.
Альтернативой программы получения полусинтетических антибиотиков, основанной на успехах органической химии, является работа по осуществлению биотрансформации по типу биоконверсии стероидов.
И, наконец, согласно последней концепции, при применении комбинации препаратов задерживается возникновение резистентности, что также указывает на важность проблемы комбинирования.
«К несчастью, возросшее применение комбинации лекарств вызвало появление R-факторов у бактерий. Эти эписомные плаз-миды способны обусловливать полную резистентность к ряду лекарств одновременно. Таким образом, при наличии R-факторов резистентность может проявляться даже к комбинации из четырех или пяти лекарств, что полностью исключает предполагаемый успех, от конкурентной терапии.
Синергизм, подобный описанному для карбеницил-лина и гентамицина, был установлен в лабораторных опытах in vivo и in vitro при применении различных комбинаций этих новейших пенициллинов с аминогликозидами [12, 15, 16, 41].
В таблице 7.3 приведены результаты действия ряда комбинаций пенициллина + аминогликозида на три штамма Ps. aeruginosa. Антибактериальную активность определяли методом микротитрования на агаровой пластинке, как это показано на рисунке 7,2.
Ампициллин и клокса-циллин оказались неэффективными при предотвращении гибели зараженных мышей, тогда как комбинация этих двух пенициллинов обладала заметным защитным действием.
Ингибирование активности 8-лактамазы проиллюстрировано на рисунке 7.6, на котором показана бактерицидная активность ампициллина и комбинации ампициллин+ клоксациллин против штамма Е. coli, вырабатывающего В-лактамазу. Ампициллин в концентрации 10 мкг/мл вызывал некоторое подавление роста в первые 3 ч, но к 6 ч концентрация его падала до 2 мкг/мл и число живых клеток было таким же, как и в контрольной культуре.
coli. Указанные дефекты, но выраженные более явно, наблюдались в твердом сычужном эммен-тальском сыре.
3. НП-закваска высокочувствительна к действию бактериофагов.
Эти результаты снизили интерес к использованию в качестве закваски низинпродуцирующих бактерий. Такие закваски применялись лишь в Голландии для получения сыров, предназначенных для переплавки.
В начале 60-х годов промышленное внедрение метода бактофу-гации только зарождалось.
Более существенным представляется различие в величине рН двух использованных сыров. Как видно из рисунка 10.15, различие между непроницаемой и проницаемой пленкой скорее обусловлено большей скоростью потери воды.
В то же время следует отметить, что уменьшение числа бактерий под водопроницаемой пленкой достигает больших размеров еще до появления различий в весе сыров. Несмотря на известный факт
повышенного токсинообразования стафилококками при возрастании в среде СОг, тем не менее снижение числа стафилококков под непроницаемой пленкой указывает на то, что это обстоятельство, не имеет практического значения для упаковки сыра [20].
По данным У. Смита и др. [3], применение в сухостойный период бензатин-клоксациллина, являющегося относительно нерапрепарат клоксациллина на быстро освобождающейся основе;---препарат клоксациллина на медленно освобождающейся (для сухостойных коров) основе.
створимой солью и проявляющего пролонгированное действие, позволяет добиться персистенции препарата и тем самым увеличить эффект его антибактериального действия против стафилококковой инфекции до 50—70 %.
В результате были опубликованы сообщение Шванновского комитета и комментарии доктора У. Смита относительно бактерий. В этих публикациях было указано на необходимость пересмотреть проблемы лечения животных и разработать такую систему лечения, которая свела бы до минимума риск постоянного существования резистентных штаммов.
Об экономическом значении болезней при разведении животных говорили Моррис и Эдлис для случая с маститами, а Говиер привел данные, согласно которым потери в свиноводстве из-за бактериальных или других инфекций для фермы в 1000 свиноматок составляют значительную величину.
coli, обычно бывает мукогеморрагическим и прогрессирующим.
При высокой дозировке антибиотики профилактируют дизентерию свиней, а эмтрил (диметридазол), введенный в рацион в дозе от 0,01 до 0,15 %, предотвращает появление клинических симптомов. 1
Бейли и др. [Г] провели обследование 17 датских свиноводческих ферм и определили типичные формы бактерий в организме погибших от пневмонии животных. В 25 % случаев обнаружены С, L и другие серотипы стрептококков: Haemophillus parahaemolyticus в 24,5 % случаев, Pasteurella в 11,4, С.
Так, Зив [52] интенсивно изучил фармакокинетику антибиотиков, предназначенных для терапии в сухостойный и лактационный периоды, и указал на более экономичные и быстрые способы оценки новых лекарственных форм по сравнению с имеющимися на сегодняшний день.
Интенсивное использование во всем мире препаратов (большая часть которых применяется наугад, автоматически и нерационально) вселяет надежду, что такое массовое применение интрацистер-нальной терапии в дальнейшем принесет какую-нибудь пользу.
Недавно Североирландским управлением по торговле молоком установлены более высокие штрафы, которые вынуждают поставщиков молока продавать молоко только без остатков антибиотиков. Однако мы должны еще пройти длинный путь, чтобы приблизиться к той ситуации, которая сложилась в Дании и Нидерландах, где в масштабе всей страны количество положительных анализов на остатки антибиотиков в молоке значительно ниже 1%, а определимый уровень соответствует 0,01 ИЕ/мл.
При дозе 24 мг/кг два теленка пали, однако эти телята во время первого введения комбинации препаратов уже были в тяжелом состоянии с необратимыми патологическими изменениями. Таким образом, в этом опыте также была подтверждена неэффективность одного триметоприма, хотя задержка смертности, как и в первом случае, была совершенно очевидной. При индивидуальном применении триметоприм и сульфонамиды обладают бактериостатическим действием in vitro, а в комбинации (наиболее часто) — бактерицидным.
Результат оказался аналогичным: диаметр соскового канала является наиболее важным фактором, от которого зависит резистентность к новой интрацистернальной инфекции [23].
В пользу защитного барьера соскового канала имеется много данных. Указанная зависимость подтверждена в опытах на 6 дойных козах, в сосковый канал которых вводили 6Х Ю-4 мл культуры Strep, agalactiae, содержащей от 1,5X102 до 1,5X104 комп-лементсвязывающих единиц культуры (КСЕ).
Антимикробным действием обладает также система лактопе-роксидаза (тиопиаиат) Н202, которая подавляет рост некоторых штаммов стрептококков, вырабатывающих молочную кислоту [24, 34]. Совсем недавно было установлено, что эта система подавляет рост Е. coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella thyphimu-riumnStaph. aureus [33]. Лактопероксидаза присутствует в молоке, однако уровень SCN- (тиоцианата) может изменяться и зависит от режима кормления.
Белки, выделяющиеся из лейкоцитов молока при воспалении, обладают антимикробной активностью и проявляют такие же антигенные и хроматографические свойства, как и катионные белки, выделенные из лейкоцитов молока [4]. Гольдштейн и др. [8] обнаружили освобождение белков из полиморфноядерных лейкоцитов в связи с последовательной активацией альтернативного пути комплемента. Известно, что такая активация может осуществляться эндотоксинами Е.
Однако ее можно выражать путем сравнения вызываемого препаратами эффекта при постоянных Q и t, либо путем сравнения концентраций, необходимых для получения одинакового Е за одинаковое t, либо путем сравнения времени действия при постоянных Е и Q.
Очевидно, что измерение потенциальной активности с учетом каждой из этих трех возможностей требует предварительного экспериментального определения каждой из переменных по отдельности.
С учетом высказанных замечаний ниже рассмотрены результаты некоторых исследований по распределению антибиотиков, в особенности полусинтетических пенициллинов, таких, как ампициллин, амоксициллин и клоксациллин, а также их значение для ветеринарного использования.
Метод диффузии в агаре идеально подходит для определения антибиотиков в жидкостях и тканях организма в широком диапазоне концентраций. При этом требуются сравнительно небольшие количества биологического материала.
Обработка образцов специфическим ферментом пенициллиназой служит простым и надежным тестом на присутствие пенициллинов.
В таблице 25.1 перечислены наиболее пригодные тест-микробы и указаны пределы их чувствительности к некоторым полусинтетическим пепициллинам. С их помощью можно проводить определение большинства полусинтетических пенициллинов в концентрациях до 0,01 мкг/мл или на 1 г ткани или жидкости тела при применении антибиотиков в ветеринарии.
До сих пор с переменным успехом предпринят ряд попыток показать ПРЛ у животных и человека. Передача in vivo продемонстрирована у животных, кишечная микрофлора которых была доведена до минимума или отсутствовала совсем. Это было достигнуто путем выращивания мышей в стерильных условиях [46, 81], использованием цыплят сразу же после их выхода из яйца [104], постановкой опытов на голодавших ягнятах, у которых микрофлора рубца была заменена бактериями группы кишечной палочки [100], или в результате применения антибиотиков [8, 9].
Таким образом, было определено количество колибактерии, резистентных по крайней мере к этим двум антибиотикам. В таблице 26.1 приведены средние данные, характеризующие каждый вид животных, а также человека.
В литературе уже сообщалось, что между видами животных имеются значительные различия по общему числу обнаруживаемых колибактерии (52, 89, 98). Особенно это характерно для взрослого крупного рогатого скота, у которого иногда колибактерии вообще невозможно установить, а если их и обнаруживают в течение многодневных наблюдений, то в очень небольшом количестве (43).
Ситуация в ветеринарии имеет аналогию и в медицине. Анти-биотикотерапия создает резистентную популяцию микроорганизмов в кишечнике человека. Особенно заметно это происходит в больницах, где антибиотики применяют широко. Контактное, перезаражение резистентными бактериями в больницах особую опасность представляет для больных хирургических отделений. К счастью, такое перезаражение резистентными бактериями редко происходит вне больниц, где живет основная масса людей.
выделенных от домашних животных. В частности, было установлено, что такие штаммы на Североамериканском континенте распространены значительно шире, поскольку там антибиотики использовали в большем объеме, чем в Европе, где они применялись в довольно ограниченном масштабе. В Северной Америке высокая степень резистентности характерна для салмонелл, изолированных от большинства видов домашних животных, тогда как.